多肽合成

01实验概述

在质谱分析之前，有必要去除盐、脱水和冻干多肽溶液。这个过程的目的是去除多肽中难以挥发的离子(如Nacl)。、Tris等)，并降低溶剂含量，从而获得适合分析的干燥样品。

这个过程基本上是通过固相提取技术实现的，主要使用C18除盐柱。在这个过程中，肽会吸附在C18柱上，盐会被洗掉。

◆目的与原理

通过去除盐、脱水和冻干多肽溶液，可以实现质谱分析的早期准备。旨在去除可能干扰后续质谱分析的多余盐，浓缩多肽样品，提高其纯度和浓度。

◆步骤总览

C18除盐柱用于除盐和浓缩，然后冷冻干燥，以确保多肽样品的纯度和浓度适合后续分析。首先，通过激活和清洁C18柱，确保其能有效吸附和清洗多肽。然后，将多肽溶液引入柱中，通过反复清洗去除杂质和盐。最后，通过逐渐增加乙腈浓度的溶液清洗和去除多肽，获得的液体通过冷冻干燥获得适合质谱分析的冷冻干燥样品。

2实验步骤

◆与柱子平衡的准备

首先用乙腈湿润C18柱，然后用不同浓度的TFA溶液激活和清洁柱子，以确保多肽的充分结合和后续清洗的完整性。首先，用80%的乙腈湿润柱子，然后立即进行后续操作。为了保证清洗和脱落过程中的效率，激活和清洁柱子是关键步骤。需要3% ACN/H2O/0.1% 用50%的TFA溶液清洗4个柱体积 ACN/H2O/0.1% 用TFA溶液清洗3个柱体积，然后用80%清洗 ACN/H2O/0.1% 用TFA溶液清洗3个柱体积，最后用3%清洗 ACN/H2O/0.1% 用TFA溶液清洗5根柱子，这些步骤保证了C18柱子的清洁度和多肽的充分结合。

◆样品处理与清洗

多肽溶液经C18柱处理后，用特定溶液反复清洗，确保样品纯度，避免盐残留影响分析结果。在柱中添加样品，并使用特定的wash buffer清洗样品管壁，以确保柱子内壁的彻底清洁。在清洗过程中，应妥善保存所有液体，不得丢弃，以确保多肽的完整性。

◆洗脱与冻干

多肽的洗涤和去除通过逐渐增加乙腈浓度，最终溶液被冷冻和干燥，以获得适合质谱分析的样品状态。在洗涤和去除过程中，依次使用30%、50%、ACN[H2]70%和80%O]/0.1% TFA溶液逐渐洗去多肽。然后，调整溶液中的ACN浓度，冷冻干燥，得到的冷冻干燥产品必须在-20°C下保存。

03注意事项

实验应严格遵守安全规范，注意乙腈和TFA溶液的浓度控制和适当条件的选择，以防止样品污染和实验风险。在实验中，乙腈的最大浓度应控制在80%，以避免溶解塑料或树脂上的聚合物，造成潜在的样品污染。此外，在溶解样品和选择实验条件时，必须选择合适的ACN浓度，以免过度改变溶液组成，影响实验结果。所有实验步骤都应严格遵守既定的安全性和实验要求。

写到最后:

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