多肽合成

1、非HPLC纯化的里面有什么杂质?

答：粗品和脱盐等级的修饰肽中修饰肽与非修饰肽类杂质：如非全长修饰肽和修饰肽后处理的某些原材料如DTT、TFA等。

2、HPLC纯化的有什么杂质?

答：通过HPLC纯化的修饰肽，仍会有很多的杂质出现，这里面的杂质通常是短肽和少许TFA。

3、多长的为适合?

答：修饰肽合成必须考虑修饰肽的长度，电荷，亲疏水性等多种因素。总长度愈长，合成粗品的纯度和产出率也随之下降，纯化难度系数和难以合成的概率便会更大。不过修饰肽功能区的序列是没有办法更改的，但为了修饰肽的圆满合成，有时候只能在功能区的上下游添加一些辅助氨基酸，以提升修饰肽的溶解度和亲疏水性。倘若修饰肽过短，合成可能会出现问题，首要难题是合成的修饰肽在后处理过程中具有一定的困难，5肽以内的修饰肽，通常得有疏水的氨基酸，不然后处理难度较大。15个氨基酸残基以下的修饰肽一般来说可以得到令人满意的产出率和得率。

4、怎样从序列中判断修饰肽的溶解性?

(1)修饰肽中要是富含高比例的疏水性比较强的氨基酸如Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp，修饰肽不容易溶解于水性溶液中或几乎无法溶解。这种氨基酸不论是纯化或合成，都可能会出现问题。

(2)正常情况下疏水性氨基酸的占比<50%，无法持续5个接连aa为疏水性，带电荷的氨基酸的占比可达20%，在修饰肽的N或C短如果可以增多极性氨基酸，也能够改善溶解性。

5、为何带有Cys,Met,或Trp的难合成?

答：含有Cys,Met，或Trp的修饰肽无法合成，并且难以获得纯度高的产品。主要是由于这些基团不太稳定，易氧化。使用和贮存这些修饰肽都要特别注意，防止重复打开盖子。

6、为什么有的的合成产率或纯度会非常低?

答：修饰肽合成与引子合成有相当大的差异，无法合成的引子非常少，但是经常会有无法合成的修饰肽。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr这样的氨基酸比邻或循环时，修饰肽链在合成流程中无法完全舒展溶解，合成效率降低。以下这些情况，合成效率和产物的纯度都非常低，如：重复Pro,Ser-Ser，重复Asp，4个连续Gly等。

7、是怎样纯化的?

答：修饰肽纯化一般采用反相柱(如C8，C18等)，214nm。缓冲体系一般是含TFA的溶液，pH2.0。BufferA为含0.1%TFAinddH2O，BufferB为1%TFA/ACN/pH2.0。纯化之前要用BufferA溶解；倘若溶解欠佳，用BufferB溶解后，随后用BufferA稀释；对疏水性高的修饰肽，有时候还要添加少许的FormicAcid或醋酸。

写到最后:

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