多肽合成

1．多肽合成的基本原理

在多肽合成化学中，多肽固相合成法可以说是一个很大的突破。它为多肽合成的自动化奠定了基础，根本原因是它不必纯化中间产物就能使合成过程能够连续进行。现阶段全自动多肽的合成，基本都是固相合成。主要过程如下：

先在Fmoc化学合成的前提下将要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，多肽合成的起始点就是这一氨基酸的氨基，另外它的氨基酸的羧基（已经活化）作用形成肽键，持续循环这一流程，即可获得目标多肽。

2．Antigen Grade 多肽是否要在多肽的一端增加 Cysteine？

答：不一定，偶连的方式与偶连的活化剂和氨基酸组成有关。EDC: 通过C端 COOH连接，一般要求序列中无Glu (E), Asp (D),或an amidated C-terminus；Act. EDC Method: 通过 N端的氨基偶连，要求序列中无Lys (K) 或N端没有被乙酰化；MBS:通过Cys的基团载体中其他 SH连接形成 S-S. 如果序列中无Cys,就需要添加Cys基团，最好增加在N端。

3．有哪些常用的载体用来制备多肽抗体？该如何选择？

答：需要与载体偶连以提高免疫源性，是因为多肽分子量很小，免疫应答效果差。载体大多数为高分量的蛋白质，比如KLH (铜蓝蛋白)，BSA, OVA等都是常用的，首选KLH。

4．多长的多肽适合做免疫用？

答：10-15个氨基酸，虽然长一些免疫效果好一些，但是合成费用会上去。10aa以下的多肽免疫效果比较差。所以推荐10-15个氨基酸。

5．多肽状态如何？如何保存储存？

答：多肽为粉末状，一般为灰白色，多肽粉末的颜色差异与它的组成相关，一般需要避光保存。长期保存应保存在-20度，短期可以保存在4度。

6．粗品和脱盐级别的纯度和多肽的长度有关吗？

答：有关

下表列出了每步合成的产率，可以看出粗品和脱盐级别与多肽长度的相关性。

7． HPLC纯化的多肽有哪些杂质？

答：主要有短肽和微量 TFA.

8．多长的多肽为合适？

答：根据多肽合成需要多肽的长度，电荷，亲疏水性等因素。长度越长，合成粗品的纯度和产率越低，纯化的难度和无法合成的几率越高。如果多肽太短，合成的多肽在后处理过程中有一定的难度，5肽以下的多肽，如果没有有疏水的氨基酸，后处理难度会很大。15个氨基酸残基以下的多肽一般都可以得到满意的产率和得率。

9．为什么含有Cys, Met, 或 Trp的多肽难合成？

答：主要因为这些基团不稳定，易氧化。这些多肽的使用和储存都需要特别注意，避免反复开启盖子。

10．为什么有些多肽的合成产率或纯度会比较低？

答：当Val, Ile,Tyr, Phe, Trp, Leu, Gln, 和Thr这些氨基酸比邻或重复时，多肽链在合成过程中不能完全舒展溶解，导致合成效率下降。比如重复 PRO，Ser-Ser, 重复Asp, 4个连续 Gly等合成效率和产物都会导致纯度比较低。

11．含 Cys的多肽如何处理？

答：含Cys 的多肽比较容易氧化。多肽纯化过程中一般都是在pH2的酸性条件性完成的，这种条件下Cys 的SH,基本保持还原状态，不需要特殊的后处理。含 Cys的多肽会慢慢的氧化，氧化的速度取决于保存条件和序列组成。如果是需要 cys形成S-S，纯化一般需要在碱性或中性条件下纯化。

写到最后:

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